Vaccin recombinant nano-coronavirus prenant de l’oxyde de graphène comme vecteur

Abstrait

L’invention appartient au domaine des nanomatériaux et de la biomédecine, et concerne un vaccin, en particulier le développement d’un nano-vaccin recombinant nucléaire du coronavirus 2019-nCoV. L’invention comprend également un procédé de préparation du vaccin et l’application du vaccin dans des expérimentations animales. Le nouveau vaccin corona contient de l’oxyde de graphène, de la carnosine, du CpG et un nouveau virus corona RBD ; la liaison de la carnosine, du CpG et du néocoronavirus RBD sur le squelette de l’oxyde de graphène ; la séquence codante CpG est représentée par SEQ ID NO 1; le nouveau coronavirus RBD fait référence à une nouvelle région de liaison au récepteur de protéine de coronavirus qui peut générer un anticorps spécifique à titre élevé visant le RBD dans un corps de souris, et fournit un support solide pour la prévention et le traitement du nouveau coronavirus.

La description

Vaccin recombinant nano-coronavirus prenant de l’oxyde de graphène comme vecteurDomaine techniqueL’invention appartient au domaine des nanomatériaux et de la biomédecine, et concerne le développement d’une plateforme de développement de vaccins. 

En particulier au développement du nano-vaccin recombinant nucléaire du coronavirus 2019-nCoV. L’invention comprend également l’utilisation du vaccin dans l’expérimentation animale.Domaine techniqueLe vaccin est une arme ultime pour éliminer les principales maladies infectieuses, a les avantages du coût le plus bas et plus d’avantages d’ennemi antérieur que d’autres thérapies, devient sans aucun doute un espoir pour le public, la variole est éliminée par les êtres humains grâce à la vaccination, les cas de poliomyélite sont réduits de 99 pour cent, les maladies infectieuses telles que la diphtérie sont rares, et le taux d’incidence de maladies telles que la rougeole, le tétanos néonatal et autres est remarquablement réduit. 

L’effet des vaccins sur la santé humaine n’est pas excessif, et la naissance de chaque nouveau vaccin est une grande victoire pour les êtres humains pour vaincre une maladie infectieuse ! À ce jour, aucun traitement médical n’a pu avoir un effet aussi important, durable et profond sur la santé humaine qu’un vaccin ; Après l’apparition de l’épidémie de SRAS-CoV-2, différents laboratoires en Chine ont terminé l’isolement des souches virales, et afin de faire un grand pas en avant dans le développement de vaccins, nous pensons que nous disposerons bientôt d’une arme finale pour l’éradication de SARS-CoV-2, cependant, jusqu’à présent, il n’y a pas de vaccin ou de médicament approuvé pour le traitement de l’infection par le CoV, et il existe un grand besoin de développer un médicament efficace pour le traitement ou la prévention de l’infection et de l’épidémie de coronavirus.Selon la recherche de vaccins contre le coronavirus tels que le SRAS et le MERS, le principal point cible du vaccin contre le coronavirus existant est la protéine S du coronavirus. Les vaccins doivent induire non seulement des réponses immunitaires humorales et cellulaires, mais également des réponses immunitaires muqueuses, et à l’aide d’adjuvants, induire des voies Th1 et Th2 équilibrées pour produire des vaccins vraiment efficaces. 

À l’heure actuelle, la recherche de davantage de vaccins contre le SRAS et le MERS se concentre principalement sur les vaccins vectoriels viraux et les vaccins sous-unitaires, et un grand nombre de recherches montrent que la difficulté du SRAS et du MERS réside dans le fait que les cellules B à mémoire à long terme ne peuvent pas être stimulées pour générer, les cellules de mémoire à long terme chez les patients guéris du SRAS et du MERS ne peuvent durer que 2-3 ans, la mémoire immunologique ne peut pas être générée et l’échec du développement du vaccin est provoqué,Divulgation de l’inventionL’invention vise à fournir un vaccin recombinant contre le coronavirus.

Un autre but de l’invention est de fournir un procédé de préparation du vaccin recombinant viral. C’est encore un autre objet de la présente invention de proposer l’utilisation du vaccin recombinant du virus. Compte tenu des divers problèmes des vaccins conventionnels à l’heure actuelle, comment changer les problèmes des vaccins existants et améliorer la réponse immunitaire est un problème qui est toujours considéré, afin d’améliorer l’immunocompétence de l’immunogène et d’améliorer la capacité de réponse immunitaire du corps, la méthode la plus basique consiste à mélanger l’immunogène avec un adjuvant, et l’adjuvant immunitaire est un promoteur capable d’améliorer la réponse immunitaire du corps à l’immunogène. L’oligodésoxynucléotide CpG (ODN) est un adjuvant très prometteur découvert ces dernières années. 

CpG ODN s’est avéré avoir une meilleure activité adjuvante in vivo, in vitro et des études cliniques chez l’animal, et les meilleures études sont CpG7909 et CpG 1018. 11/9.2017, le vaccin contre l’hépatite B approuvé par Dynavax Technologies des États-Unis d’Amérique FDA et utilisant CpG1018 comme adjuvant est sur le marché, est le premier vaccin adjuvant CpG ODN approuvé dans le monde et est utilisé pour prévenir l’infection par le VHB des adultes de 18 ans et plus anciens, et une pluralité de types différents d’ODN CpG sont utilisés comme adjuvants dans une pluralité d’essais cliniques. CpG est combiné avec TLR9 pour activer les cellules pDC immatures et induire une réponse immunitaire naturelle et adaptative, mais une seule structure CpG a un effet d’activation limité sur les cellules immunitaires et est facile à hydrolyser rapidement par l’exonucléase, de sorte que la stabilité du CpG in vivo est insuffisant et des effets secondaires sont également causés; L’oligodésoxynucléotide CpG (ODN) synthétisé dans la séquence peut également renforcer l’effet de stimulation,Le graphène est un nanomatériau de carbone bidimensionnel constitué d’atomes de carbone dans des orbitales hybrides sp dans un réseau hexagonal en nid d’abeille. L’unité structurelle de base du matériau est le cycle benzénique à six chaînons le plus stable du matériau organique, et le matériau est actuellement le matériau bidimensionnel le plus idéal. 

L’oxyde de graphène (GO) est un dérivé d’oxyde de graphène et est un produit exfolié. En raison des caractéristiques de l’hybridation SP2 unique, d’une structure bidimensionnelle parfaite et d’une réactivité élevée du bord, la plate-forme de traitement basée sur la structure hybride peut être utilisée comme support de charge et de greffage idéal dans la conception et le développement, et joue un rôle important dans les aspects des systèmes d’administration de nano-médicaments, la détection biologique, le traitement des tumeurs, l’imagerie cellulaire et similaires.La présente invention a été réalisée sur la base des études mentionnées ci-dessus.L’invention concerne un tout nouveau procédé de développement de vaccin basé sur un matériau d’oxyde de graphène servant de cadre pour le chargement de molécules CpG et de protéines recombinantes. Sur la base du plateau technique, un nouveau nano-vaccin couronne est préparé en combinant la protéine recombinante de la région RBD de la protéine Spike du SAR-CoV-2. 

Le nano nouveau vaccin corona préparé a une immunogénicité plus forte dans les expériences sur la souris et peut générer des anticorps à titre élevé. Dans un aspect, l’invention propose un vaccin contre le coronavirus comprenant de l’oxyde de graphène, de la carnosine, du CpG et du RBD. Dans un mode de réalisation préféré de l’invention, le vaccin est nommé vaccin GO-Car-carnosine-CpG-RBD.

L’oxyde de graphène (GO) est un oxyde de graphène, et après oxydation, les groupes fonctionnels contenant de l’oxygène sur l’oxyde de graphène sont augmentés, de sorte que l’oxyde de graphène est plus actif que le graphène. Par exemple, les groupes hydroxyle et les groupes époxy sont répartis de manière aléatoire sur un monolithe d’oxyde de graphène, tandis que les groupes carboxyle et les groupes carbonyle sont introduits au bord du monolithe. Les produits commerciaux courants d’oxyde de graphène se présentent sous forme de poudre, de paillettes et de solutions, et sont de couleur brun-jaune.

La carnosine, connue sous le nom scientifique de -alanyl-L-histidine, est un solide cristallin composé d’un dipeptide constitué de deux acides aminés, la β-alanine et la L-histidine. La carnosine a une forte capacité antioxydante et peut piéger les espèces réactives de l’oxygène (ROS) et les aldéhydes alpha-bêta insaturés, qui sont formés par la suroxydation des acides gras dans les membranes cellulaires pendant le stress oxydatif.Les motifs CpG ont pour effet d’activer le système immunitaire de l’organisme et peuvent être utilisés comme adjuvants. De préférence, la séquence codante CpG est représentée par SEQ ID NO 1.RBD (domaine de liaison au récepteur de pointe), spécifiquement un domaine de liaison au récepteur (RBD) de la protéine de coronavirus (protéine S) dans la présente invention. Par exemple, la protéine RBD peut être sélectionnée comme suit :

PNITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGVEGFNCYFPLQGYQRVPYH

le vaccin contre le coronavirus décrit par l’invention est obtenu en combinant de la carnosine, du CpG et un nouveau coronavirus RBD sur de l’oxyde de graphène activé.Le dosage de GO dans le vaccin contre le coronavirus fourni par l’invention est utilisé comme base de charpente, le dosage est généralement excessif, et le dosage de carnosine peut être environ le double de celui de GO. Le CpG et le nouveau coronavirus RBD sont utilisés comme macromolécules biologiques, et le dosage du CpG et du nouveau coronavirus RBD est inférieur, et est généralement un dix millième de celui du GO en rapport de masse. Et le RBD est utilisé en une quantité supérieure à 2 fois celle du CpG, telle que CpG :

RBD = 1 : 2-10, de préférence, le dosage du RBD est 3 à 6 fois celui du CpG.Dans un autre aspect, la présente invention propose un procédé de préparation du vaccin contre le coronavirus, le procédé comprenant les étapes consistant à :

– obtention de CpG, protéine recombinante RBD et carnosine ;ajouter de la poudre GO lyophilisée dans une solution tampon phosphate et effectuer un traitement aux ultrasons ;ajouter de l’EDC et du NHS pour activer la solution GO, éliminer l’EDC/sulfo-NHS en excès dans la solution réactionnelle par ultrafiltration et ajuster le pH de la solution réactionnelle pour qu’il soit neutre ;ajouter de la carnosine, des protéines recombinantes CpG et RBD à la solution réactionnelle, en incubant avec du GO activé ;l’excès de protéine non conjuguée a été retiré de la solution réactionnelle et stérilisé pour utilisation.

De préférence, la durée des ultrasons est de 2 à 3 heures. Les conditions ultrasonores étaient de 200W, 40 kHz.De préférence, le tampon phosphate a un pH neutre, par exemple 6,8 à 7,6, plus préférablement 7,0 à 7,4 ou 7,2.De préférence, le procédé d’élimination de l’excès d’EDC/sulfo-NHS ou de protéine non conjuguée est l’ultrafiltration.

Dans un mode de réalisation préféré de la présente invention, le rapport d’oxyde de graphène, de carnosine, de CpG et de RBD est : 26 mg : 40 mg : 1,2. g : (3-6) g.Preferably, the reaction temperature is 20-28 ℃. For example, room temperature is used.Dans un mode de réalisation préféré de la présente invention, le vaccin GO-Car-carnosine-CpG-RBD est préparé par le procédé suivant : GO a été couplé à la carnosine en utilisant une modification de la réaction EDC-NHS, 26 mg de poudre lyophilisée GO ont été ajoutés à 5,20 mL de tampon phosphate (PBS, pH = 7,4) et soniqué (200W, 40 kHz) à 25 ℃ pendant 3 h. La solution GO a été activée par l’ajout de 6,82 mg d’EDC (N1- ((éthylimino) méthyl-ène) -N3, N3-diméthyl propane-1,3-diamine, chinois : 1- (3-diméthylaminopropyl) -3-éthylcarbodiimide ) et 7,73 mg de NHS (NN-hydroxysuccinimide) à 25 . L’excès d’EDC/sulfo-NHS a été éliminé de la solution réactionnelle par ultrafiltration et le pH de la solution a ensuite été ajusté à 7,4. Ensuite, 40mg de carnosine, 1,2ug CpG, et diverses concentrations de protéine recombinante RBD ont été ajoutées à la solution et mises à réagir avec du GO activé à 25 ℃ pendant 2 h. 

Par la suite, l’excès de protéine non conjuguée a été éliminé de la solution réactionnelle par ultrafiltration. Le produit préparé est marqué comme vaccin GO-Car-carnosine-CpG-RBD. Enfin, la solution de vaccin GO-Car-carnosine-CpG-RBD a été mise en contact avec un filtre stérile (0,22 um) et stockée dans des récipients stériles à 4 pour des expériences ultérieures.L’invention établit une plate-forme technique de préparation de vaccins à nanoprotéines recombinantes capable d’exciter rapidement le système immunitaire humain et peut produire rapidement une grande quantité de vaccins préventifs après confirmation des virus infectieux. La plate-forme technique utilise pleinement la caractéristique selon laquelle la surface de l’oxyde de graphène est dotée de groupes COOH, hydroxyle et autres, et utilise l’interaction entre les liaisons pi-pi pour assembler la protéine recombinante RBD criblée, les molécules CpG et la carnosine ensemble pour préparer le nano recombinant vaccin protéique basé sur l’oxyde de graphène comme cadre. Le vaccin peut stimuler un organisme à générer un anticorps neutralisant RBD à titre élevé visant le SAR-CoV-2, et jette une base technique pour prévenir et traiter l’infection à coronavirus et les futures grandes épidémies d’épidémies similaires.Dans un autre aspect, l’invention propose une application du vaccin GO-Car-carnosine-CpG-RBD, à savoir une application du vaccin GO-Car-carnosine-CpG-RBD dans la préparation d’un médicament pour prévenir un nouveau coronavirus.

De préférence, l’application de la composition peut améliorer l’immunité des organismes au nouveau coronavirus.De préférence, le vaccin GO-Car-carnosine-CpG-RBD peut générer des anticorps spécifiques visant le RBD, et le titre d’anticorps spécifiques est élevé. Dans le mode de réalisation de l’invention, le vaccin nano neocorona réalise une immunogénicité plus forte dans un test de souris et peut générer des anticorps à titre élevé.L’invention a pour effets bénéfiques que :une toute nouvelle plate-forme technique de vaccin est développée pour une molécule CpG chargée de cadre et une protéine recombinante basée sur un matériau d’oxyde de graphène et combinée à la protéine recombinante de la région RBD de la protéine Spike de SAR-CoV-2 pour préparer un nouveau nano coronavirus vaccin, un anticorps spécifique à titre élevé visant le RBD peut être généré dans un corps de souris, et un soutien solide est fourni pour la prévention et le traitement du nouveau coronavirus.

Dessins

Afin d’illustrer plus clairement les solutions techniques dans les modes de réalisation de la présente demande, les dessins devant être utilisés dans les modes de réalisation seront brièvement décrits ci-dessous, et il est évident que les dessins dans la description suivante ne sont que quelques modes de réalisation de la présente application, et il est évident pour l’homme du métier d’obtenir d’autres dessins sans efforts créatifs.

FIGUE. 1 est un diagramme schématique et une représentation schématique dans le temps de l’immunisation de souris par le vaccin GO-Car-carnosine-CpG-RBD;

FIGUE. 2 montre le changement d’anticorps RBD spécifique dans le sérum 28 jours après l’immunisation des souris et le changement de la production de cytokines par les cellules spléniques 42 jours après l’immunisation des souris.

Description détaillée :

Les solutions techniques dans les modes de réalisation de la présente demande seront décrites clairement et complètement ci-dessous, et il doit être compris que les modes de réalisation décrits ne sont qu’une partie des modes de réalisation de la présente demande, et non tous les modes de réalisation. Tous les autres modes de réalisation, qui peuvent être déduits par l’homme du métier des modes de réalisation donnés ici sans faire aucun effort créatif, entreront dans la portée de protection de la présente demande. Des procédés et des techniques non spécifiquement décrits peuvent être exécutés en utilisant des techniques classiquement connues dans l’art. Par exemple, reportez-vous au manuel de clonage moléculaire de Cold Spring Harbor.

Exemple 1

Processus de préparation de la préparation de vaccin à base d’oxyde de graphène (GO) -carnosine-CpG-RBDSélection d’une séquence d’acide nucléique du récepteur TLR9 CpG ODN M362 qui présente une réaction croisée à la fois chez l’humain et chez la souris, dans laquelle la séquence spécifique est la suivante :

5′-TCGTCGTCGTTC : GAACGACGTTGAT-3′ (25 mer, SEQ ID NO 1), couplage GO avec carnosine en utilisant une modification de la réaction EDC-NHS, 26mg d’une poudre lyophilisée de GO ont été ajoutés à 5,20 mL de tampon phosphate (PBS, pH = 7,4) et soniqués (200W, 40 kHz) à 25 ℃ pendant 3 h. La solution GO a été activée par l’ajout de 6,82 mg d’EDC (N1- ((éthylimino) méthyl-ène) -N3, N3-diméthyl propane-1,3-diamine, chinois : 1- (3-diméthylaminopropyl) -3-éthylcarbodiimide ) et 7,73 mg de NHS (NN-hydroxysuccinimide) à 25 . L’excès d’EDC/sulfo-NHS a été éliminé de la solution réactionnelle par ultrafiltration et le pH de la solution a ensuite été ajusté à 7,4. Ensuite, 40mg de carnosine, 1,2ug CpG, et diverses concentrations de protéine recombinante RBD ont été ajoutées à la solution et mises à réagir avec du GO activé à 25 ℃ pendant 2 h. Par la suite, l’excès de protéine non conjuguée a été éliminé de la solution réactionnelle par ultrafiltration. Le produit préparé est marqué comme vaccin GO-Car-carnosine-CpG-RBD. 

Enfin, la solution de vaccin GO-Car-carnosine-CpG-RBD a été mise en contact avec un filtre stérile (0,22 um) et stockée dans des récipients stériles à 4 pour des expériences ultérieures. Exemple 2Test de souris immunisées par le vaccin à base de protéine recombinante oxyde de graphène (GO) -carnosine-CpG-RBDDes souris BALB/c femelles âgées de 6 semaines ont été immunisées par injection sous-cutanée à 0, 14 et 28 jours, respectivement, pendant 28 jours et 42 jours selon le schéma montré à la Fig. 1, le sang a été collecté en prélevant du sang à , et le sérum a été séparé et testé pour les anticorps spécifiques contre le RBD. Les souris ont été sacrifiées à 42 jours, les splénocytes isolés et testés pour les réponses immunitaires spécifiques des lymphocytes T et la sécrétion de cytokines.Regroupement et détermination de la dose des souris immunisées :1. (oxyde de graphène + carnosine) + 1.2ug cpG +3ug RBD(oxyde de graphène + carnosine) + 1.2ug cpG +6ug RBD3. Hydroxyde d’aluminium +6ug RBD (1: 1)4. 6ug RBD5. Liposome (lipo) + 6ug groupe RBDSouches de souris : BALB/c mic (n = 6).

Le schéma d’immunisation des souris avec le vaccin GO-Car-carnosine-CpG-RBD est le suivant : du sang a été collecté et d’abord immunisé comme point de départ pour l’immunisation des souris. Et (5) collecter du sang pour la deuxième fois le 7 ème jour et inspecter un nouveau système d’ajout de virus corona pour maîtriser le principe. Collecte de sang pour la troisième fois au jour 14 et renforcement de l’immunité. Prélèvement de sang pour la quatrième fois au jour 28, renforcement de l’immunité, détection des anticorps dans le sérum et, s’il est positif, préparation du prélèvement de cellules spléniques. La cinquième collecte de sang au jour 42, après quoi le sang a été sacrifié et les splénocytes ont été isolés et soumis à des expériences sur les cytokines.

The test results show that 3ug and 6ug groups of the GO-Car-carnosine-CpG-RBD vaccine generate high-titer specific antibodies for RBD after mice are immunized, and the GO-Car-carnosine-CpG-RBD vaccine is significantly different from the traditional adjuvant group, the RBD group and the liposome group (figure 2).

Further analyzing the specific immune response of the T cells separated from the spleen, the result shows that the GO-Car-carnosine-CpG-RBD vaccine can stimulate the organism to generate specific IFN-gamma cytokines, improve the immunity of the organism and resist the epidemic situation of new coronavirus.La description ci-dessus ne concerne que les modes de réalisation spécifiques de la présente demande, mais la portée de la présente demande n’y est pas limitée, et tout changement ou substitution qui peut être facilement conçu par l’homme du métier dans le cadre technique de la présente divulgation. doivent être couverts par le champ d’application de la présente demande. Par conséquent, la portée de protection de la présente demande sera soumise à la portée de protection des revendications.

LISTE DES SÉQUENCES<110> Shanghai nanotechnologie et centre national appliqué pour la recherche en ingénierie Ltd<120> nano nouveau vaccin recombinant contre le coronavirus utilisant de l’oxyde de graphène comme vecteur<130> 2020200920<160> 2<170> BrevetEn version 3.5<210> 1<211> 25<212> ADN<213> Séquence artificielle<220><223> Séquence artificielle<400> 1tcgtcgtcgt tcgaacgacg ttgat 25<210> 2<211> 192<212> IMP<213> Séquence artificielle<220><223> Séquence artificielle<400> 2Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr1 5 10 15Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys20 25 30Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe35 40 45Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr50 55 60Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln65 70 75 80Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu85 90 95Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu100 105 110Asn Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg115 120 125Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr130 135 140Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr145 150 155 160Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr165 170 175Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro180 185 190

Réclamations (10)Masquer la personne à charge 

1. Vaccin contre le coronavirus, dans lequel ledit coronavirus comprend de l’oxyde de graphène, de la carnosine, du CpG et un nouveau domaine de liaison au récepteur du coronavirus ; la liaison de la carnosine, du CpG et d’une nouvelle région de liaison au récepteur du coronavirus sur un squelette d’oxyde de graphène ; la séquence codante CpG est représentée par SEQ ID NO 1; la nouvelle région de liaison au récepteur du coronavirus fait référence à une nouvelle région de liaison au récepteur de la protéine S du coronavirus.2. Coronavirus selon la revendication 1, dans lequel le coronavirus est obtenu en liant la carnosine, le CpG et une région de liaison au récepteur du coronavirus sur de l’oxyde de graphène activé.3.

Procédé de production d’un coronavirus selon la revendication 1, comprenant les étapes de :l’obtention de CpG, une protéine recombinante d’une région de liaison au récepteur et de la carnosine, dans laquelle la séquence codante de CpG est représentée par SEQ ID NO 1 ; ajouter la poudre lyophilisée d’oxyde de graphène dans une solution tampon phosphate et effectuer un traitement aux ultrasons ; ajouter de l’EDC et du NHS pour activer la solution d’oxyde de graphène, éliminer l’excès d’EDC/sulfo-NHS dans la solution réactionnelle par ultrafiltration et ajuster le pH de la solution réactionnelle pour qu’il soit neutre ; ajouter de la carnosine, du CpG et de la protéine recombinante de la région de liaison au récepteur à une solution réactionnelle et incuber avec de l’oxyde de graphène activé ;l’excès de protéine non conjuguée a été retiré de la solution réactionnelle et stérilisé pour utilisation.4. Procédé selon la revendication 3, dans lequel la durée de sonication est comprise entre 2 et 3 heures.5. Procédé selon la revendication 3, dans lequel le tampon phosphate a un pH de 6,8 à 7,6.6. Procédé selon la revendication 3, dans lequel le procédé d’élimination de l’EDC/sulfo-NHS en excès ou d’élimination des protéines non couplées est l’ultrafiltration.7. Procédé selon la revendication 3, dans lequel la quantité de carnosine est de 1,5 fois ou plus la quantité d’oxyde de graphène, la quantité de la région de liaison au récepteur est de 2 à 10 fois la quantité de CpG, et la quantité de CpG est de un dix millième d’oxyde de graphène, basé sur le rapport de masse.8. Procédé selon l’une quelconque des revendications 3 à 7, dans lequel la température de réaction est de 20 à 28 .9. Utilisation d’un coronavirus selon la revendication 1, caractérisée en ce que ledit nouveau vaccin corona est utilisé pour la préparation d’un médicament pour la prévention d’un coronavirus.10. Utilisation selon la revendication 9, dans laquelle le coronavirus amène le corps à produire des anticorps contre des protéines recombinantes du domaine de liaison au récepteur.